慢病毒简介

慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。

慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定,原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中,并随细胞基因组的分裂而分裂。另外,慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比,比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体,有鲜明的特色。大量文献研究表明,慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。

慢病毒表达载体删除了HIV病毒绝大多数基因,仅保留了HIV病毒的LTR序列,包装信号,Rev应答原件等。因此免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。

慢病毒包装系统

慢病毒包装系统主要有慢病毒表达载体和包装载体及胞膜载体构成,一般由三个(二代系统)或者四个质粒(三代系统)构成,包装病毒所用细胞一般为293系列的细胞,其主要过程是将组成慢病毒系统的质粒共转染293细胞,48-72h后收集细胞培养基上清,经过浓缩纯化后的到慢病毒粒子。
 
枢密科技慢病毒载体是在国际通用的第三代载体系统为基础,通过一定改建、构成四质粒体系。其中转移载体(transfer vector)包含转移目的基因的慢病毒骨架及其包装产生相应基因组RNA的所有顺式作用元件,可以单一或多重组合的稳定或条件诱导下表达转移基因或 shRNA;另外,通过三个辅助质粒提供病毒包装所需的反式作用因子,同时采用“自我灭活”修饰,阻止子代病毒自我复制和转移,从而确保产生的慢病毒具备良好的生物安全性。

载体应用

◆将目的基因/RNAi基因转入难以转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞
◆将目的基因/RNAi基因转入动物组织,以期获得长期表达。
◆构建稳定表达目的蛋白/RNAi的细胞系,再用ex vivo的方法导入动物体内
◆基因治疗
◆转基因动物
◆基因敲除
◆药物研究:构建表达受体蛋白的细胞系,研究药物的作用
◆快速建立生产目的蛋白的细胞系,非常有前途的真核细胞表达方法

应用实例

1.慢病毒感染肿瘤细胞

LVS1

2.慢病毒感染小鼠脑细胞

3.慢病毒表达shRNA干扰靶基因表达

LVS3

4.慢病毒长期稳定表达外源基因

 

包装服务流程

(一)表达靶基因的慢病毒包装流程:

 

 (二)表达shRNA 的慢病毒包装流程:

(三)稳定细胞系构建:

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